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Clustered Regularly-Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas9|CRISPR/Cas9
CRISPR / Cas9（聚簇有規(guī)律間隔的短回文重復序列/ Cas9）是一種細菌免疫系統(tǒng)，已經(jīng)適應了哺乳動物細胞中的基因組編輯。 Cas9是一種可編程核酸酶，通過將一個約20個核苷酸的重組“引導RNA”（gRNA）與靶位點結(jié)合，在DNA中產(chǎn)生雙鏈斷裂（DSB）。 Cas9產(chǎn)生的DSB通常是通過該單元容易出錯的非同源末端連接（NHEJ）途徑修復的，從而導致了小的插入或缺失（indels）。絕大多數(shù)插入缺失會改變閱讀框，引入過早的終止密碼子或?qū)е聼o意義的mRNA衰變，從而有效地“敲除”基因。CRISPR / Cas9系統(tǒng)在特定基因編輯方面已做出了巨大的努力，并已成功應用于修飾人類和其他生物的游離基因組。 CRISPR / Cas9系統(tǒng)利用原核RNA引導的可編程核酸酶，該酶可以在前導RNA的指導下在特定位點產(chǎn)生雙鏈DNA斷裂（DSB）。 DSB過程取決于兩個基本成分的共表達：指導RNA（gRNA）和Cas9核酸酶。制作特定的DSB可以通過容易出錯的非同源末端連接（NHEJ）或同源直接修復（HDR）觸發(fā)DNA修復。在存在CRISPR / Cas9系統(tǒng)的情況下，NHEJ抑制劑SCR7被證明可以在哺乳動物細胞中將Cas9介導的HDR的效率提高至少7倍。通過CRISPR / Cas9進行基因組編輯已成為對活細胞基因組進行精確，有針對性的改變的有效且可靠的方法。
