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生命科學(xué)>信號(hào)通路>細(xì)胞周期/ DNA損傷>Clustered Regularly-Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas9>
Clustered Regularly-Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas9|CRISPR/Cas9
CRISPR / Cas9（聚簇有規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列/ Cas9）是一種細(xì)菌免疫系統(tǒng)，已經(jīng)適應(yīng)了哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的基因組編輯。 Cas9是一種可編程核酸酶，通過(guò)將一個(gè)約20個(gè)核苷酸的重組“引導(dǎo)RNA”（gRNA）與靶位點(diǎn)結(jié)合，在DNA中產(chǎn)生雙鏈斷裂（DSB）。 Cas9產(chǎn)生的DSB通常是通過(guò)該單元容易出錯(cuò)的非同源末端連接（NHEJ）途徑修復(fù)的，從而導(dǎo)致了小的插入或缺失（indels）。絕大多數(shù)插入缺失會(huì)改變閱讀框，引入過(guò)早的終止密碼子或?qū)е聼o(wú)意義的mRNA衰變，從而有效地“敲除”基因。CRISPR / Cas9系統(tǒng)在特定基因編輯方面已做出了巨大的努力，并已成功應(yīng)用于修飾人類(lèi)和其他生物的游離基因組。 CRISPR / Cas9系統(tǒng)利用原核RNA引導(dǎo)的可編程核酸酶，該酶可以在前導(dǎo)RNA的指導(dǎo)下在特定位點(diǎn)產(chǎn)生雙鏈DNA斷裂（DSB）。 DSB過(guò)程取決于兩個(gè)基本成分的共表達(dá)：指導(dǎo)RNA（gRNA）和Cas9核酸酶。制作特定的DSB可以通過(guò)容易出錯(cuò)的非同源末端連接（NHEJ）或同源直接修復(fù)（HDR）觸發(fā)DNA修復(fù)。在存在CRISPR / Cas9系統(tǒng)的情況下，NHEJ抑制劑SCR7被證明可以在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中將Cas9介導(dǎo)的HDR的效率提高至少7倍。通過(guò)CRISPR / Cas9進(jìn)行基因組編輯已成為對(duì)活細(xì)胞基因組進(jìn)行精確，有針對(duì)性的改變的有效且可靠的方法。
