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測定葉綠素含量
Release Time：2020-07-20一、測定葉綠素含量實驗原則
※ 測定葉綠素含量是根據(jù)蘭伯特-比爾定律，有色溶液的吸光度A由葉綠體色素提取物在可見光譜上的吸收來確定?？梢允褂梅止夤舛扔嬙谀承┨囟úㄩL下計算提取物中每種色素的吸光度，它與溶質(zhì)濃度C和液體層L的厚度成正比，即A =αCL，其中：α比例常數(shù)。
※ 當溶液濃度為百分數(shù)且液體層厚度大約為1cm的時候，α 被定義為物質(zhì)的吸收系數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長下的吸收系數(shù)，可以通過測量在不同波長下具有已知濃度的純物質(zhì)來進行測量。如果溶液中存在幾種吸收劑，則在一定長度下混合溶液的總吸光度等于相應波長下的吸光度之和中各組分的總吸光度。這就是吸光度的可加性。
※ 要測定葉綠體顏料混合提取物中的葉綠素a，b以及類胡蘿卜素的含量時，只需要確定提取物在特定波長下吸光度系數(shù)A，并根據(jù)該波長下的葉綠素a，b以及類胡蘿卜素，就可以消除在確定葉綠素a和b時，由于類胡蘿卜素帶來的干擾，所用單色光的波長選擇了紅光區(qū)域中葉綠素的最大吸收峰。
二、測定葉綠素含量所需的實驗材料，設備和試劑
| 測定葉綠素含量所需的試劑清單 | ||||
| 序號 | 產(chǎn)品 | CAS號 | 貨號 | 備注 |
| 1 | 乙醇95% | 64-17-5 | JT26000 | |
| 2 | 甲醛 | 50-00-0 | JT12051 | |
| 3 | 石英砂 | 14808-60-7 | JT0062 | |
| 4 | 碳酸鈣粉 | 471-34-1 | JT8655 | |
（2）所需的儀器設備：1.分光光度計； 2.砂漿； 3.電子天平（感官0.01g）； 4.深色的容量瓶； 5.小漏斗； 6.吸收紙； 7.定量濾紙； 8.滴管； 9.擦拭邊框紙。
（3）所需的試劑：96％乙醇（或80％甲醛），石英砂；碳酸鈣粉末。
三、測定葉綠素含量的實驗步驟
1.測試葉綠素前首先需要取新鮮的植物葉子（或其他綠色組織）或干物質(zhì)，擦去組織表面的污垢，切成小塊（除去中脈），并充分混合。
2.然后稱取新鮮切碎的樣品0.2g，共3份，放在研缽中，加入少量石英砂，碳酸鈣粉和2-3ml 95％乙醇，研磨成均勻的漿液，再加入10ml乙醇，并繼續(xù)研磨，直到組織變白。靜置3-5分鐘。
3.取一張濾紙，放入漏斗中，用乙醇潤濕，將提取物沿玻璃棒倒入漏斗中，過濾至25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽，杵和殘留物幾次，最后一次將殘留物一起倒入漏斗中。
4.使用滴管吸取乙醇，并將濾紙上的所有葉綠體顏料洗入容量瓶中。直到濾紙中沒有綠色和殘留物為止。最后，用乙醇稀釋至25ml并搖勻。
5.將葉綠體色素提取物倒入比色皿中，光路為1厘米。以95％乙醇為空白，在665nm和649nm處測量吸光度。
四、、測定葉綠素含量實驗結果的計算：
將測得的吸光度的值代入方程中：Ca = 13.95A665-6.88A649; Cb ＝ 24.96A649-7.32A665。依照實驗數(shù)據(jù)計算，可得出葉綠素a和葉綠素b的濃度（Ca，Cb：mg / L），兩者之和為葉綠素的總濃度。最后，可以根據(jù)以下方程式計算得出植物組織中葉綠素的含量：
※ 葉綠素的含量測定結果（mg / g）= [葉綠素的濃度×葉綠素的提取量×混合倍數(shù)] /樣品鮮重（也可以采用樣品干重計算）。
