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FISH（即熒光原位雜交）技術
Release Time：2020-07-19一、FISH（即熒光原位雜交）技術實驗原理
FISH（即熒光原位雜交）技術作為分子診斷的重要工具，在科研和臨床診斷領域都有著廣泛的應用。FISH檢測是利用熒光基團標記DNA探針，再將標記的DNA探針與樣本DNA進行原位雜交，最后在熒光顯微鏡下對熒光信號進行計數(shù)，以此作為診斷的依據(jù)。FISH的操作簡便快捷，結果直觀準確，因此FISH成了許多疾病診斷的首選工具。下面我們將從探針的設計，樣本的制備，原位雜交和檢測結果的觀察等幾個方面簡單介紹FISH的操作。
探針是FISH檢測靈敏度和準確性的關鍵。FISH檢測的準確性來源于探針的設計。FISH能否應用于某一領域也取決于是否具有相應的探針。用于FISH檢測的探針必須具備很高的特異性，能特異性地識別特定的基因或染色體上特定的片斷。而且FISH的探針必須能經(jīng)受原位雜交的處理而不變性。熒光基團的標記也直接影響了檢測的靈敏度和原位雜交結果的檢測方式。
二、樣本的制備：
1. 1000轉/分離心羊水（AF）5分鐘。羊水應沒有血色或褐色。
2. 用2-5ml的1×胰酶/EDTA溶液（0.05%胰酶，0.53MEDTA4Na的Hank氏平衡鹽溶液，不含CaCl2、MgCl2.6H2O、MgSO4.7H2O）懸浮沉淀，37℃水浴15分鐘以上
3. 1000轉/分離心5分鐘
4. 用2-5ml的0.56%KCl溶液懸浮細胞，37℃水浴20分鐘。這些處理步驟的目的是使羊水細胞成為懸浮的單細胞。
5. 加0.8-2ml的固定液（3∶1甲醇∶冰醋酸）至細胞低滲液中，輕輕混勻
6. 1000轉/分離心懸液5分鐘，用1ml新的固定液重新懸浮細胞。4℃保存固定的樣本30分鐘以上，直至FISH檢測前。若要長期保存，-20℃保存在固定液中
7. 制片前根據(jù)懸浮細胞數(shù)調整懸液的體積。若儲存時間超過一個月以上，在制片前用固定液清洗細胞
8. 直接滴加細胞懸液至1-2片預冷的玻片上，每片2個雜交區(qū)（每個區(qū)域15-25霯細胞懸液）
三、實驗所需儀器：
| 序列 | 產品名 | 貨號 | CAS號 | 備注 |
| 1 | KCL | JT0010 | 7447-40-7 | |
| 2 | 甲醇 | JT25999 | 67-56-1 | |
| 3 | EDTA溶液 | SS0008 | 6381-92-6 | |
| 4 | FT-200 | 200ul黃吸頭 | ||
| 5 | F-EP020 | 2ml圓底連蓋離心 |
