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熒光原位雜交技術(shù)（Fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）
Release Time：2022-11-17熒光原位雜交技術(shù)介紹：
熒光原位雜交（FISH）是用于核型分析、細胞基因分型、癌癥診斷、物種鑒定和基因表達分析的強大工具，用于顯示細胞內(nèi)的DNA或定位RNA。
熒光原位雜交技術(shù)應(yīng)用
※ 染色體異常檢測
※ 基因圖譜
※ 新致癌基因的鑒定/遺傳病的診斷
※ 物種識別
Fluorescence DNA In Situ Hybridization- Assay Work Flow
樣品制備：
1） 如果測試樣品是材料（細胞系、染色體制備等），則在將其應(yīng)用到顯微鏡載玻片（涂層、印記、細胞自旋）上后，有必要將制備物以3:1的比例固定在甲醇和乙酸的混合物中10分鐘。固定混合物總是在使用前準備好。固定后讓制劑自然干燥，然后進行共變性和雜交。
2） 如果試樣是石蠟切片，則首先需要在硅烷化或帶正電的玻片上將FFPE組織切成5μm切片，在56°C下烘烤組織切片過夜，對材料進行脫蠟和預處理。
共變性與雜交：
1） 以覆蓋試樣的量涂抹探頭，并用清潔的蓋玻片覆蓋。涂膠后，有必要用合適的橡膠粘合劑涂覆蓋板玻璃。
2） 在73±1°C溫度下對制備的載玻片進行變性1-5分鐘。
3） 在37°C的潮濕室內(nèi)培養(yǎng)過夜。
洗滌未結(jié)合的探針：
1） 松開蓋玻片，將制劑浸入加熱至73±1°C的洗滌溶液1（0.4x SSC/0.3%NP-40）中。在溶液中輕輕搖動帶有制劑的玻璃約3-5秒。培養(yǎng)1分鐘45秒。
2） 轉(zhuǎn)移至洗滌溶液2（2x SSC/0.1%NP-40），再次搖動約3-5秒，并孵育30秒。
3） 將玻璃邊緣貼在吸收墊上，輕輕擦干，在黑暗中自然晾干。
4） 使用含有DAPI或DAPI防褪色的安裝介質(zhì)（對于尺寸最大為22×22 mm的玻璃蓋，使用10μl DAPI）。目的是以能夠使用熒光顯微鏡觀察細胞核的方式對細胞核進行染色。
5） 用蓋玻片覆蓋，并用熒光顯微鏡檢查。
