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WB(Western Blotting)實驗方法
Release Time：2022-10-031. 電泳
制備并運行SDS PAGE凝膠。選擇一種凝膠百分比，該凝膠百分比將為所分析的抗原大小提供最佳分辨率（如果已知）。如果尺寸未知，12%的凝膠是一個良好的起點。裝載足夠的蛋白質(zhì)，每孔提供0.1-1ng抗原。加載樣品的連續(xù)稀釋通常是有利的，以確保至少有一條車道處于最佳檢測范圍內(nèi)。如果需要，使用預(yù)處理標記，如國家診斷的原標記，以監(jiān)測轉(zhuǎn)移效率。
2. 轉(zhuǎn)移
運行完成后，凝膠必須轉(zhuǎn)移到吸液膜上。這可以通過半干轉(zhuǎn)移或濕轉(zhuǎn)移來實現(xiàn)。兩者都是電泳轉(zhuǎn)移，需要為此目的設(shè)計的設(shè)備。以下概述的程序旨在作為概述。為了獲得最佳效果并確保安全，請遵循設(shè)備制造商在此階段的說明。
3. 半干砌塊
用去離子水沖洗電極板。
將六張沃特曼3MM紙和一張吸墨紙切成凝膠大?。ɑ蛏孕。?br /> 弄濕薄膜。將硝化纖維素浸泡在去離子水中3分鐘。將PVDF浸泡在甲醇中1分鐘。將膜轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)移緩沖液（由0.02M三堿、0.15M甘氨酸和20%甲醇組成）中，浸泡3分鐘。
4. 組裝轉(zhuǎn)移管
在下板（正極，紅色導(dǎo)線）上，按以下順序放置這些項目：
三張3MM的紙（預(yù)先切割并用轉(zhuǎn)移緩沖液潤濕）
轉(zhuǎn)移膜
5. 凝膠
三片3MM（預(yù)切割并用轉(zhuǎn)移緩沖液潤濕）
用10ml移液管在每層上滾動，去除所有氣泡。小心不要打亂吸管，或讓凝膠粘在吸管上。如果需要，在放置第一層上層紙后，將凝膠卷起來。請注意，被困在煙囪中的氣泡會扭曲電流，導(dǎo)致橫向頻帶位移和頻帶傳輸失敗。
檢查以確保上紙疊的任何部分都不會接觸到凝膠下方的紙張或電極。上下堆棧之間的觸點將短路電流，從而扭曲傳輸。在某些系統(tǒng)中，可在凝膠周圍布置副膜或塑料膜，以防止發(fā)生短路。檢查說明。
將上部（負極，黑色引線）電極板放在堆棧頂部，并通電。查閱儀器說明書；典型的條件是0.8mA/cm2下1小時。過度轉(zhuǎn)移可能會使凝膠干燥，并使蛋白質(zhì)通過硝化纖維膜。
