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AEBSF（DFP,PMSF無毒替代物）
Release Time：2022-10-01AEBSF介紹：
AEBSF是一種不可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑。AEBSF已被證明抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、纖溶酶、激肽釋放酶和凝血酶。它通過酶活性部位的?；瘉硪种?。作為PMSF和DFP的替代品，AEBSF具有更低的毒性、更好的水溶性和更好的水溶液穩(wěn)定性。AEBSF已用于細(xì)胞培養(yǎng)，濃度高達(dá)0.25mM。水溶液在pH值5-6之間穩(wěn)定；pH 7.5以上的有限穩(wěn)定性。
AEBSF的優(yōu)點(diǎn)
※ AEBSF已被證明抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、纖溶酶-激肽釋放酶和凝血酶。作為PMSF和 DFP替代品，AEBSF具有更低的毒性、更好的水溶性和更好的水溶液穩(wěn)定性。
※ 苯基甲烷磺酰氟（PMSF）和二異丙基氟磷酸鹽（DFP）的緩蝕常數(shù)相似。
常用蛋白酶抑制劑：
AEBSF、抑肽酶、PMSF、EDTA
AEBSF案例：
絲氨酸蛋白酶抑制劑AEBSF阻斷DNA損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，但不阻斷TNFa觸發(fā)的細(xì)胞凋亡。（a）添加Etoposide (足葉乙甙)后在指定時(shí)間點(diǎn)采集的IGRmyc-3細(xì)胞的全細(xì)胞裂解物的蛋白質(zhì)印跡。細(xì)胞在沒有或存在10mm Z-VAD-FMK或400mm AEBSF的情況下處理。上部用識別全長和裂解PARP的抗體培養(yǎng)，下部用裂解caspase-3的抗體培養(yǎng)。標(biāo)記p20和p17亞單位。（b）如圖所示，用8 Gy照射IGRmyc-3細(xì)胞或用TNF a處理。通過Western blotting測定全長PARP（b）和裂解PARP（v）。（c）使用底物DEVD-AFC測定DEVDase活性。左部分代表了三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)，即在指定的時(shí)間段內(nèi)用足葉乙甙處理IGRmyc-3細(xì)胞，無論是否預(yù)處理400 m m AEBSF。右側(cè)代表用TNF a處理16小時(shí)的IGRmyc-3細(xì)胞，無需預(yù)處理，或用10 m m zVAD–fmk或400 m m AEBSF預(yù)處理。該圖至少可以代表兩個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)。（d）如圖所示，在AEBSF(mm）和/或10 mm Z-VAD-FMK濃度增加的情況下，IGRmyc-3細(xì)胞未經(jīng)處理或用足葉乙甙處理24或32小時(shí)。24小時(shí)和32小時(shí)PI陽性未處理細(xì)胞的百分比分別為17%和14%。從相應(yīng)的 足葉乙甙 處理樣品中減去在沒有足葉乙苷的情況下培養(yǎng)的PI陽性細(xì)胞的背景百分比。（e）在不存在或存在所示抑制劑的情況下，用 足葉乙甙 處理IGRmyc細(xì)胞。3小時(shí)后，刷新培養(yǎng)基和抑制劑，培養(yǎng)細(xì)胞1周。通過Giemsa溶液染色觀察細(xì)胞。左面板顯示了在六孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞的照片。右邊的面板顯示了放大50倍的相同細(xì)胞培養(yǎng)物的顯微照片
