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PMSF蛋白酶抑制劑使用中的常見(jiàn)問(wèn)題
Release Time：2022-10-01一、PMSF的作用：
實(shí)驗(yàn)中常用到的PMSF功能主要是絲氨酸蛋白酶抑制劑，苯甲基磺酰氟（PMSF）通常用于制備細(xì)胞裂解液，有助于保存樣品。作為一種非特異性抑制劑，PMSF通常用于保護(hù)樣品免受蛋白酶（如胰蛋白酶、糜蛋白酶和凝血酶）以及其他酶的消化功能的影響。PMSF也用于制備從細(xì)胞和組織中提取的蛋白質(zhì)提取物。通過(guò)使含有這種氨基酸的任何酶的絲氨酸羥基失活，PMSF可以防止感興趣的蛋白質(zhì)降解。基于其短半衰期，必須在每個(gè)凈化步驟中添加該抑制劑。
二、PMSF的應(yīng)用：
※ 通常用于蛋白質(zhì)溶解，在細(xì)胞裂解后使特定蛋白質(zhì)失活；
※ 絲氨酸蛋白酶抑制劑；
※ FAAH抑制劑；
三、PMSF化學(xué)數(shù)據(jù)
PMSF化學(xué)結(jié)構(gòu)：
化學(xué)分子式：C7H7FO2S
CAS編號(hào)：329-98-6
分子量：174.2 Da
外觀(guān)：白色細(xì)針/結(jié)晶粉末
純度：99%
由BIOFOUNT公司提供的PMSF。
四、PMSF 使用過(guò)程常見(jiàn)問(wèn)題解答
1.PMSF在水中會(huì)發(fā)生什么現(xiàn)象？
苯基甲基磺酰氟的溶解度有限，在水溶液中極不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前立即將其添加到緩沖區(qū)中。苯甲基磺酰氟水溶液在pH值為8時(shí)的半衰期約為30分鐘。
2. PMSF有危險(xiǎn)嗎？
苯基甲基磺酰基氟化物是一種細(xì)胞毒性化學(xué)物質(zhì)，只能在通風(fēng)柜或經(jīng)認(rèn)證的生物實(shí)驗(yàn)臺(tái)中使用。
3. 有沒(méi)有無(wú)毒的替代品？
AEBSF（4-[2-氨基乙基]-苯磺酰氟化物、鹽酸鹽或Pefabloc）是一種無(wú)毒替代品。它是一種不可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑，使用濃度與PMSF相同，但在水緩沖溶液中無(wú)毒且穩(wěn)定。
4. 如何制定PMSF實(shí)驗(yàn)方案？
儲(chǔ)備溶液通常用無(wú)水乙醇、異丙醇或二甲基亞砜配制。苯基甲基磺酰氟也可溶于乙醚、苯、（無(wú)水2-丙醇（200 mM）、無(wú)水甲醇（200 mC）和無(wú)水乙醇（200 mT）。在0.1至1 mM最終濃度的大多數(shù)蛋白質(zhì)溶液中有效。以17.4 mg/mL（100 mM）的速度將PMSF溶于異丙醇中，并在-20°C下保存在等分溶液中。
a.稱(chēng)出17.4mg PMSF抑制劑
b.加入異丙醇至10ml，溶解。
c.無(wú)需過(guò)濾或消毒。
d.等分并儲(chǔ)存于20°C。
5. PMSF產(chǎn)品是否需要特殊處理？
※ 苯基甲基磺酰氟具有細(xì)胞毒性和吸濕性，應(yīng)避光保護(hù)。
※ 如果增加pH值和溫度，這種抑制劑會(huì)發(fā)生什么變化？
※ 失活率隨著pH值的增加而增加，并且在25°C時(shí)比在4°C時(shí)更快。
6.這種抑制劑的半衰期是多少？
※ 20 mM PMSF水溶液在pH 8.0下的半衰期約為35 min。
※ 該產(chǎn)品的GHS分類(lèi)是什么？
H301分類(lèi)急性毒性3（口服），皮膚H314，腐蝕性1B，眼部損傷H318 1。
7. 苯甲基磺酰氟的結(jié)合位點(diǎn)是什么？
抑制劑與絲氨酸蛋白酶中的活性位點(diǎn)絲氨酸殘基特異性結(jié)合，但不與蛋白質(zhì)中的任何其他絲氨酸殘?bào)w結(jié)合。
8. PMSF能用于X射線(xiàn)晶體學(xué)嗎？
該抑制劑與活性絲氨酸殘基處的酶共價(jià)結(jié)合，可通過(guò)X射線(xiàn)結(jié)晶學(xué)觀(guān)察到該酶；因此，該抑制劑可以作為一種化學(xué)標(biāo)記來(lái)識(shí)別酶中的必需活性位點(diǎn)絲氨酸。
