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ER-Tracker Green（BODIPY FL 格列本脲）使用方法
本實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)牛肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞優(yōu)化，且已被其他常規(guī)細(xì)胞系驗(yàn)證。但不同的細(xì)胞類(lèi)型其最佳使用條件不同，還需用戶(hù)根據(jù)該方案進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化。
1. 準(zhǔn)備試劑
使用前將ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)回溫至室溫，并簡(jiǎn)短離心使該DMSO溶液至管底。
2.  細(xì)胞樣品處理及染色
2.1 將1mM ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)儲(chǔ)存液按照實(shí)驗(yàn)要求稀釋至工作濃度，推薦工作濃度為～1µM。建議在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下盡量使用較低濃度探針，以避免由于濃度過(guò)高染色導(dǎo)致的假象。
注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡鹽溶液（HBSS/Ca/Mg）稀釋該探針進(jìn)行染色，可得到最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2.2 染色過(guò)程
對(duì)于貼壁細(xì)胞，吸除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基，用HBSS清洗細(xì)胞，加入預(yù)熱的染料工作液于37℃孵育細(xì)胞15-30min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養(yǎng)液，并在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。
細(xì)胞如需固定，請(qǐng)參考以下步驟。
3．細(xì)胞固定
3.1 固定細(xì)胞：用4%甲醛于37℃固定細(xì)胞2min。
注：已染色細(xì)胞用醛固定后，僅部分ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)留在細(xì)胞內(nèi)，熒光信號(hào)會(huì)有部分衰減。
3.2 清洗觀察細(xì)胞：細(xì)胞固定后，可用合適緩沖液進(jìn)行清洗，每次5min，共2次。清洗后可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)封片、鏡檢或進(jìn)一步染色。
注：不建議對(duì)細(xì)胞進(jìn)行透化處理，因?yàn)榻?jīng)Triton X-100透化后，無(wú)信號(hào)保留。

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名稱(chēng)	ER-Tracker Blue-white 藍(lán)色	ER-Tracker Green 綠色	ER-Tracker Red 紅色
貨號(hào)
Ex/Em	374/430-640nm	504/511nm	587/615nm
濾片推薦	DAPI OR UV Long pass	FITC	TRITC
分子量	580.5283	783.0952	915.2316
分子式	C26H21F5N4O4S	C37H42BClF2N6O6S	C44H42BClF2N6O7S2
活細(xì)胞	Yes	Yes	Yes
固定細(xì)胞	No	No	No
探針標(biāo)記后可固定	Yes	Yes	Yes
檢測(cè)平臺(tái)	成像	成像	成像

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用 ER-Tracker Green 和 MitoTracker Red CMXRos 標(biāo)記的活牛肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞。

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使用 ER-Tracker™ Green (BODIPY® FL Glibenclamide)（綠色）對(duì)活 HeLa 細(xì)胞進(jìn)行共聚焦免疫熒光分析。 藍(lán)色偽彩 = DRAQ5（熒光 DNA 染料）。

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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1. 避光保存，避免反復(fù)凍融，可根據(jù)單次用量分裝保存。避免將本品儲(chǔ)存于無(wú)霜冰箱；
2. ER-Tracker Green (1mM)在4℃條件下、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，使用前可以20-25℃水浴片1-5分鐘至全融解后使用。對(duì)于微量的液體，使用前需要離心數(shù)秒鐘后，使液體充分沉降到管底；
3. 本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！

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