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一、0.4%臺盼藍染液介紹：
※ 臺盼藍染色液: 又稱錐蟲藍染色液,用于細胞染色,細胞計數(shù)臺盼藍(Trypan blue)又稱錐藍或錐蟲藍等，分子式為C34H24N6Na4O14S4，分子量為960.81，CAS Number 72-57-1，是一種陰離子型染料。Trypan blue不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色，即產(chǎn)生所謂的拒染現(xiàn)象,而死亡細胞的細胞膜通透性增加，可使染料通過細胞膜進入細胞內(nèi)，使死細胞著色呈藍色，是生物實驗中常用的檢測細胞活率的方法。通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反。因此，借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養(yǎng)中生物實驗中常用的死細胞鑒定染色方法之一。
※ 細胞膜完整性差異：活細胞的細胞膜具有選擇透過性，能夠阻止臺盼藍染料進入細胞內(nèi)部，因此活細胞不被染色，呈無色透明狀。
※ 死細胞染色機制：死細胞或細胞膜受損的細胞，其細胞膜失去選擇透過性，臺盼藍染料可自由進入細胞內(nèi)，與細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合，使細胞呈現(xiàn)藍色。
BIOFOUNT Trypan blue stain(1%)常用于檢測細胞膜的完整性以及細胞是否存活。活細胞不會被染成藍色，而死細胞會被染成淡藍色。臺盼藍可被巨噬細胞吞噬，故可用于巨噬細胞的活體染色劑。臺盼藍染色后，通過顯微鏡下直接計數(shù)或顯微鏡下拍照后計數(shù)，就可以對細胞存活率進行比較精確的定量，0.4%為常用的濃度。

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二、細胞染色注意事項
※ 染色特性：染色速度快，通常在室溫下孵育 1-5 分鐘即可完成染色，且染色結(jié)果直觀，易于通過顯微鏡觀察判斷。
※ 毒性：臺盼藍對細胞有一定毒性，染色后的細胞不宜繼續(xù)用于后續(xù)培養(yǎng)或功能實驗，僅適用于一次性的活力檢測。
※ 穩(wěn)定性：0.4% 為常用工作濃度，該濃度下染液穩(wěn)定性較好，密封避光保存于 4℃環(huán)境中，可嘗試保存。

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三、臺盼藍染液的質(zhì)控
※ 外觀標準
顏色：深藍色澄清液體
無沉淀、無渾濁、無絮狀物
無肉眼可見顆粒雜質(zhì)
※ 濃度標準
臺盼藍含量：0.4%（w/v）± 0.02%
溶劑：0.85% NaCl 生理鹽水 / PBS（pH 7.2–7.4）
※ 理化指標
pH：7.0–7.6
滲透壓：260–320 mOsm/kg（等滲，不造成細胞脹裂 / 皺縮）
過濾除菌：0.22 μm 濾膜過濾
內(nèi)毒素：≤0.5 EU/mL（細胞級必須）
※ 染色性能標準
染色清晰：死細胞呈均勻深藍，無雜染、無背景色
活細胞清晰透亮，無邊緣著色
不結(jié)晶、不聚團，不干擾計數(shù)
染色時間寬容度好：3–10 min 內(nèi)結(jié)果穩(wěn)定。

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四、臺盼藍染液用途
※ 臺盼藍（Trypan Blue）是一種陰離子型重氮染料，不能穿過完整的活細胞膜。
細胞膜完整、有選擇性通透 → 染料無法進入 → 細胞不著色、透亮。細胞膜完整、有選擇性通透 → 染料無法進入 → 細胞不著色、透亮；
※ 光學顯微鏡下細胞計數(shù)：總細胞數(shù)、活細胞數(shù)、死細胞數(shù)。計算：細胞存活率 = 活細胞數(shù) / 總細胞數(shù) × 100%；
適用：哺乳動物細胞、懸浮細胞、貼壁細胞消化后、原代細胞等。

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