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怎么做細(xì)胞爬片免疫組化染色實驗
Release Time：2020-07-20一.細(xì)胞切片的免疫組織化學(xué)染色實驗簡介：
通過將玻片浸入細(xì)胞培養(yǎng)基和在玻片上生長的細(xì)胞來進(jìn)行細(xì)胞玻片的免疫組織化學(xué)染色。它主要用于組織學(xué)和免疫組織化學(xué)。 ，冷凍切片，細(xì)胞涂片，原位雜交等
二.進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色實驗所需的試劑：
乙醇二甲苯蘇木精; PBS緩沖液；3，3′-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）
三.細(xì)胞切片免疫組織化學(xué)染色實驗的操作步驟：
1.取出細(xì)胞切片，迅速放入冷丙酮中固定20-30分鐘。 2.在蒸餾水中浸泡兩次，每次約5分鐘。 3.在沖孔液中浸泡5分鐘。 4.在蒸餾水中浸泡兩次，每次約5分鐘。 5.使用普通血清密封：從染色罐中取出切片，擦去切片背面的水分和切片正面組織周圍的水分（以保持組織濕潤），并添加正常的山羊血清或兔血清（與二抗相同）動物血清）處理，并在37°C下保持約15分鐘。 6.再次添加一抗：用濾紙吸收血清，無需洗滌，直接在37℃下添加一抗約2小時（也可以在4℃的冰箱中放置過夜）。 7.在PBS緩沖液中：5分鐘，2次（置于搖床上）。 8.在37℃，40分鐘內(nèi)逐滴添加生物素化的二抗。 9.在PBS緩沖溶液中：約5分鐘，2次（置于搖床上）。 10. 37℃40分鐘，再次滴加第三抗體（SAB復(fù)合物）。 11.在PBS緩沖溶液中：5分鐘，2次（置于搖床上）。 12. DAB顯色，在顯微鏡下觀察，并及時終止（終止自來水沖洗）。 13.用自來水（純凈水）徹底沖洗。 14.蘇木精復(fù)染，室溫下30秒鐘，用自來水沖洗。 15.用自來水沖洗15分鐘，以恢復(fù)藍(lán)色。 16.梯度酒精脫水：80％，2分鐘，95％，2分鐘，100％，2次，5分鐘。 17.二甲苯透明：I和II（二甲苯）各5分鐘18.安裝：加拿大膠（或中性膠）
四、胞攀爬玻片的免疫組化染色注意事項：
1.步驟3和4僅用于檢測細(xì)胞內(nèi)抗原，而在檢測細(xì)胞膜抗原時不使用。 2.正常血清的制備步驟：用PBS以1:20的比例制備，并以50μl+ 5μl（10％噴霧量）計算每片所需的量。
五、細(xì)胞爬片免疫組化染色實驗所需試劑清單
| 序號 | 產(chǎn)品名 | 貨號 | CAS | 備注 |
| 1 | PBS緩沖液 | HC2031 | ||
| 2 | 蘇木精 | SX0217 | 517-28-2 | |
| 3 | 乙醇 | JT26000 | 64-17-5 | |
| 4 | 二甲苯 | JT24017 | 1330-20-7 | |
| 5 | 3,3'-二氨基聯(lián)苯胺 | JT9459 | 91-95-2 |
