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凍干培養(yǎng)細(xì)菌的方法
Release Time：2022-10-161. 凍干簡介：
冷凍干燥，也稱為凍干或冷凍干燥，是在產(chǎn)品冷凍后除去水分并將其置于真空中的過程。這使得冰可以從固體變?yōu)檎羝?，而無需經(jīng)過液相。冰（或其他冷凍溶劑）通過升華過程從產(chǎn)品中可以去除，是結(jié)合水分子通過解吸過程去除。※ 常用細(xì)菌培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基和普通瓊脂培養(yǎng)基，LB培養(yǎng)液，TSB培養(yǎng)液，TSA培養(yǎng)基等，F(xiàn)T培養(yǎng)液，TSC培養(yǎng)基，麥康凱培養(yǎng)基，血瓊脂平板。
2. 什么情況下適合冷凍干燥
長期保存細(xì)菌、真菌、酵母或其他微生物培養(yǎng)物的最佳方法之一是使用冷凍干燥過程。這一簡短的實驗室程序可以與任何商用冷凍干燥器一起進(jìn)行，以保存培養(yǎng)物收集。
因為冷凍干燥是最復(fù)雜和最昂貴的干燥形式，所以該過程通常僅限于價值較高的細(xì)膩、熱敏材料。未被冷凍損壞的物質(zhì)通常可以凍干，因此無需冷藏。
凍干的過程可能只需要三個小時，也可能需要24小時（不包括培養(yǎng)物生長時間）。
3. 實驗所需儀器
※ 冷凍干燥機(jī)
※ 高壓滅菌器
※ 營養(yǎng)素或其他合適的瓊脂平板
※ 培育培養(yǎng)物的孵化器
※ 玻璃棒
※ 凍干緩沖液
※ 用橡皮塞壓接頂部小瓶（用壓接器壓接瓶蓋）
4. 凍干及存儲過程需要的試劑
※ 常用凍干保護(hù)劑：10%脫脂奶粉，5%蔗糖，1%明膠，溶于純水中
※ 凍干保護(hù)劑的作用：凍干保護(hù)劑是在在凍結(jié)和干燥過程中，可以防止活性組分發(fā)生變性。
※ 填充劑：能防止有效組分隨水蒸汽一起升華逸散，并使有效組分成形。
※ 抗氧化劑：用作防止生物制品在冷凍干操過程以及儲藏過程中發(fā)生氧化變質(zhì)。
※ 酸堿調(diào)整劑：在冷凍干澡過程和儲藏過程中，能將生物制品的pH調(diào)整到活性物質(zhì)的最穩(wěn)定區(qū)域。
5. 凍干的步驟
a. 所有凍干培養(yǎng)基、保護(hù)劑以及容器等均需高溫高壓滅菌。高壓滅菌前，在試管內(nèi)貼上印有培養(yǎng)物標(biāo)識的紙標(biāo)簽。或者，使用帶無菌帽的試管；
b. 取一環(huán)分離后所得到的細(xì)菌菌液或者是甘油保存的菌液，在細(xì)菌培養(yǎng)板上分區(qū)或者使用蛇形劃板（大腸桿菌在麥康凱平板上劃板），37℃倒置培養(yǎng)并過夜；
c. 取一只干凈并且進(jìn)行高溫高壓滅菌后的試管，倒入大約10ml的細(xì)菌培養(yǎng)液（大腸桿菌用磅培養(yǎng)液），從過夜培養(yǎng)后的培養(yǎng)平板中取一個單菌落至該培養(yǎng)液中后，在37℃溫度條件下振蕩培養(yǎng)過夜；
d. 取10支清洗干凈且進(jìn)行滅菌處理后的西林瓶，每個西林瓶中加入 1ml的凍干保護(hù)劑，后加入過夜培養(yǎng)后的1ml 菌液，蓋上無菌橡膠塞，備注：需要保留出氣孔，并做好標(biāo)記后，存放于-80℃冰箱冷凍存儲；
e. 細(xì)菌凍干機(jī)預(yù)熱約30分鐘后，迅速將已冷凍的菌液放在細(xì)菌凍干機(jī)上，打印幾小時至十幾小時不等細(xì)菌已凍干。
f. 凍干后關(guān)閉凍干機(jī)，取出已經(jīng)凍干好的細(xì)菌，壓蓋密封，存儲在 -80℃條件下超低溫冰箱保存，可存放數(shù)年。
