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DAPI溶液（配制,使用方法,步驟）
Release Time：2022-06-29DAPI溶液配制以及DAPI溶液使用方法：
1. DAPI 產(chǎn)品介紹：
DAPI (28718-90-3,DAPI Dihydrochloride)是一種熒光 DNA 染料，可與雙鏈 DNA 的小溝結(jié)合，優(yōu)先選擇富含腺嘌呤和胸腺嘧啶 (AT) 的 DNA。 DAPI 常用于顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)。 DAPI 可用于固定細(xì)胞或活細(xì)胞，盡管它在活細(xì)胞中的跨膜效率較低并且需要使用更高的濃度。采用DAPI配制 DAPI染色液：濃度為5 mg/ml，推薦工作濃度為0.5-10μg/ml。
備注：DAPI溶解度
2. DAPI溶液一般使用：ddH2O配制，溶液的濃度為 5mg/ml，推薦DAPI溶液工作濃度為0.5-10μg/ml之間。DAPI，也被稱為：DAPI dihydrochloride，DAPI是一種可穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合以后，可產(chǎn)生比 DAPI 自身強(qiáng)超過(guò)20倍的熒光。與傳統(tǒng)的 EB (溴化乙錠，ethidium bromide)進(jìn)行比較，DAPI 對(duì)雙鏈DNA 的染色靈敏度要比EB的染色靈敏度高很多倍。因 DAPI 是含有特定 AT序列DNA 的一種嵌入劑，DAPI 可以像 Hoechst染料 一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)上。
雖然 DAPI 不能通過(guò)活細(xì)胞膜，但 DAPI 可以穿透擾亂的細(xì)胞膜而對(duì)核進(jìn)行染色。DAPI 具有較高的光漂白承受能力，可以用于檢測(cè) 酵母線粒體DNA，病毒DNA，葉綠體DNA，microplasm DNA 及 染色體DNA。DAPI與DNA偶聯(lián)物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為：360nm/460nm。
DAPI染色實(shí)驗(yàn)經(jīng)常應(yīng)用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)以及染色后用熒光顯微鏡觀察等。當(dāng)然 DAPI 也用于普通 細(xì)胞核染色 及特定情況下雙鏈DNA的染色使用。
3. DAPI 結(jié)構(gòu)式:
4. DAPI溶液 使用步驟：
a. 取1mg的DAPI粉末，離心使粉末沉積在保存管底，后取1mL 的ddH2O將 DAPI粉末溶解，可以制備出 2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。 備注：※ 不使用的制備液需要按照每次試驗(yàn)需求量分裝存儲(chǔ)，以免反復(fù)凍融對(duì)試劑活性造成影響；
※ DAPI 不可以用 PBS緩沖溶液或者其他緩沖液直接進(jìn)行溶解，需要先用水將其溶解。
b. 取需要量的 DAPI溶液 加入 PBS緩沖液中，制得 10~50µM的 DAPI溶液。
※ 可選擇采用以下方法配制 PBS緩沖液： 稱?。?.00g NaCl，0.20g KCl，0.2g KH2PO4以及2.9g Na2HPO4·12H2O，溶于1L純水中制得。
c. 量取 1/10培養(yǎng)基體積 的 DAPI溶液 加至細(xì)胞培養(yǎng)基里，當(dāng)然也可采取 1/10濃度 的 DAPI緩沖液 替代培養(yǎng)基。
d. 在37℃恒溫條件下，培養(yǎng)細(xì)胞約10~20分鐘，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)調(diào)節(jié)培養(yǎng)時(shí)間。
e. 之后再用 PBS緩沖液 或其他 適合的緩沖液 對(duì)細(xì)胞清洗2-3次。
f. 最后使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察細(xì)胞，熒光顯微鏡需帶有 360nm激發(fā)波長(zhǎng)和460nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光片的。
1. DAPI 產(chǎn)品介紹：
DAPI (28718-90-3,DAPI Dihydrochloride)是一種熒光 DNA 染料，可與雙鏈 DNA 的小溝結(jié)合，優(yōu)先選擇富含腺嘌呤和胸腺嘧啶 (AT) 的 DNA。 DAPI 常用于顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)。 DAPI 可用于固定細(xì)胞或活細(xì)胞，盡管它在活細(xì)胞中的跨膜效率較低并且需要使用更高的濃度。采用DAPI配制 DAPI染色液：濃度為5 mg/ml，推薦工作濃度為0.5-10μg/ml。
備注：DAPI溶解度
- DMF: 0.2 mg/ml
- DMSO: 3 mg/ml
- Ethanol: 0.2 mg/ml
2. DAPI溶液一般使用：ddH2O配制，溶液的濃度為 5mg/ml，推薦DAPI溶液工作濃度為0.5-10μg/ml之間。DAPI，也被稱為：DAPI dihydrochloride，DAPI是一種可穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合以后，可產(chǎn)生比 DAPI 自身強(qiáng)超過(guò)20倍的熒光。與傳統(tǒng)的 EB (溴化乙錠，ethidium bromide)進(jìn)行比較，DAPI 對(duì)雙鏈DNA 的染色靈敏度要比EB的染色靈敏度高很多倍。因 DAPI 是含有特定 AT序列DNA 的一種嵌入劑，DAPI 可以像 Hoechst染料 一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)上。
雖然 DAPI 不能通過(guò)活細(xì)胞膜，但 DAPI 可以穿透擾亂的細(xì)胞膜而對(duì)核進(jìn)行染色。DAPI 具有較高的光漂白承受能力，可以用于檢測(cè) 酵母線粒體DNA，病毒DNA，葉綠體DNA，microplasm DNA 及 染色體DNA。DAPI與DNA偶聯(lián)物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為：360nm/460nm。
DAPI染色實(shí)驗(yàn)經(jīng)常應(yīng)用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)以及染色后用熒光顯微鏡觀察等。當(dāng)然 DAPI 也用于普通 細(xì)胞核染色 及特定情況下雙鏈DNA的染色使用。
3. DAPI 結(jié)構(gòu)式:
4. DAPI溶液 使用步驟：
a. 取1mg的DAPI粉末，離心使粉末沉積在保存管底，后取1mL 的ddH2O將 DAPI粉末溶解，可以制備出 2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。 備注：※ 不使用的制備液需要按照每次試驗(yàn)需求量分裝存儲(chǔ)，以免反復(fù)凍融對(duì)試劑活性造成影響；
※ DAPI 不可以用 PBS緩沖溶液或者其他緩沖液直接進(jìn)行溶解，需要先用水將其溶解。
b. 取需要量的 DAPI溶液 加入 PBS緩沖液中，制得 10~50µM的 DAPI溶液。
※ 可選擇采用以下方法配制 PBS緩沖液： 稱?。?.00g NaCl，0.20g KCl，0.2g KH2PO4以及2.9g Na2HPO4·12H2O，溶于1L純水中制得。
c. 量取 1/10培養(yǎng)基體積 的 DAPI溶液 加至細(xì)胞培養(yǎng)基里，當(dāng)然也可采取 1/10濃度 的 DAPI緩沖液 替代培養(yǎng)基。
d. 在37℃恒溫條件下，培養(yǎng)細(xì)胞約10~20分鐘，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)調(diào)節(jié)培養(yǎng)時(shí)間。
e. 之后再用 PBS緩沖液 或其他 適合的緩沖液 對(duì)細(xì)胞清洗2-3次。
f. 最后使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察細(xì)胞，熒光顯微鏡需帶有 360nm激發(fā)波長(zhǎng)和460nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光片的。
