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DAPI(介紹,染色步驟,染色,毒性)
Release Time：2022-06-07DAPI 介紹：
DAPI (DAPI化學(xué)名：4',6-diamidino-2-phenylindole) 是一種 DNA 特異性探針，DAPI 是一種熒光染料，通過附著在富含 A-T 的 DNA 序列的小樹林中形成熒光復(fù)合物。 DAPI 還可以穿透細(xì)胞膜與細(xì)胞核中的雙鏈DNA結(jié)合進(jìn)而發(fā)揮出生物標(biāo)記的作用，可以產(chǎn)生比 DAPI 本身 強(qiáng)約 20倍的熒光。 與EB（溴化乙啶）相比較，DAPI 對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度高很多倍。顯微鏡下可以看出顯藍(lán)色熒光的細(xì)胞。DAPI 可作為 DNA 特異性探針在組織化學(xué)和生物化學(xué)中用于流式細(xì)胞術(shù)、染色體染色、DNA 可視化和定量的應(yīng)用。
DAPI染色原理：
DAPI 是一種可以與 DNA 進(jìn)行強(qiáng)力結(jié)合的最常用的熒光染料。DAPI 結(jié)合至雙鏈 DNA小溝 的AT堿基對(duì)位置，一個(gè) DAPI分子 可占據(jù)約三個(gè)堿基對(duì)位置。結(jié)合到 雙鏈DNA 上的 DAPI分子 后的熒光強(qiáng)度大約可提高20倍，一般采用熒光顯微鏡進(jìn)行觀測(cè)即可，依據(jù)熒光強(qiáng)度可以確定出DNA的量。此外，因 DAPI 可透過完整的細(xì)胞膜，也可用于 活細(xì)胞 和固定細(xì)胞的染色。在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察，DAPI染料 是利用紫外光波長(zhǎng)的光線進(jìn)行激發(fā)。單獨(dú) DAPI 的最大吸收波長(zhǎng)是340nm，DAPI的最大發(fā)射波長(zhǎng)是488nm；當(dāng) DAPI 與 雙鏈DNA 進(jìn)行結(jié)合，DAPI的最大吸收和發(fā)射波長(zhǎng)分別為：364nm，454nm（10 mM Tris pH7.0，100 mM NaCl，10 mM EDTA），其發(fā)散光的波長(zhǎng)范圍含蓋了藍(lán)色至青綠色。DAPI也可與RNA進(jìn)行結(jié)合，但產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度只有約為DNA結(jié)合的熒光強(qiáng)度的1/5，其發(fā)散光的波長(zhǎng)范圍約在500nm左右。
DAPI染色步驟：
DAPI的染色步驟見鏈接：
《怎么使用DAPI進(jìn)行染色》
http://www.tingxia.cc/cn/content/427.html
