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DAPI(介紹,染色步驟,染色,毒性)

Release Time:2022-06-07

DAPI 介紹:
DAPI (DAPI化學(xué)名:4',6-diamidino-2-phenylindole) 是一種 DNA 特異性探針,DAPI 是一種熒光染料,通過附著在富含 A-T 的 DNA 序列的小樹林中形成熒光復(fù)合物。 DAPI 還可以穿透細(xì)胞膜與細(xì)胞核中的雙鏈DNA結(jié)合進(jìn)而發(fā)揮出生物標(biāo)記的作用,可以產(chǎn)生比 DAPI 本身 強(qiáng)約 20倍的熒光。 與EB(溴化乙啶)相比較,DAPI 對雙鏈DNA的染色靈敏度高很多倍。顯微鏡下可以看出顯藍(lán)色熒光的細(xì)胞。DAPI 可作為 DNA 特異性探針在組織化學(xué)和生物化學(xué)中用于流式細(xì)胞術(shù)、染色體染色、DNA 可視化和定量的應(yīng)用。

 
DAPI染色原理:
DAPI 是一種可以與 DNA 進(jìn)行強(qiáng)力結(jié)合的最常用的熒光染料。DAPI 結(jié)合至雙鏈 DNA小溝 的AT堿基對位置,一個 DAPI分子 可占據(jù)約三個堿基對位置。結(jié)合到 雙鏈DNA 上的 DAPI分子 后的熒光強(qiáng)度大約可提高20倍,一般采用熒光顯微鏡進(jìn)行觀測即可,依據(jù)熒光強(qiáng)度可以確定出DNA的量。此外,因 DAPI 可透過完整的細(xì)胞膜,也可用于 活細(xì)胞 和固定細(xì)胞的染色。在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察,DAPI染料 是利用紫外光波長的光線進(jìn)行激發(fā)。單獨 DAPI 的最大吸收波長是340nm,DAPI的最大發(fā)射波長是488nm;當(dāng) DAPI 與 雙鏈DNA 進(jìn)行結(jié)合,DAPI的最大吸收和發(fā)射波長分別為:364nm,454nm(10 mM Tris pH7.0,100 mM NaCl,10 mM EDTA),其發(fā)散光的波長范圍含蓋了藍(lán)色至青綠色。DAPI也可與RNA進(jìn)行結(jié)合,但產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度只有約為DNA結(jié)合的熒光強(qiáng)度的1/5,其發(fā)散光的波長范圍約在500nm左右。

DAPI染色步驟:
DAPI的染色步驟見鏈接:

《怎么使用DAPI進(jìn)行染色》
http://www.tingxia.cc/cn/content/427.html


 

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