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慢速響應(yīng)型探針（Slow response probes）
Release Time：2022-02-10慢速響應(yīng)型探針
慢速響應(yīng)型探針（Slow-Response Probes ）對(duì)膜電位的反應(yīng)主要通過改變探針分子在膜表面的富集與分布，因此 慢速響應(yīng)型探針 對(duì)膜電位的反應(yīng)較慢，往往需至少數(shù)十毫秒。但是 慢速響應(yīng)型探針 對(duì)膜電壓的反應(yīng)較靈敏，熒光變程可以達(dá)到100%每100 mV。由于對(duì)電壓的靈敏度高，慢響應(yīng)探針可以檢測(cè)到未極化的普通細(xì)胞膜表面的電壓變化，比如離子通道活動(dòng)，藥物受體結(jié)合等引起的細(xì)微膜電壓改變。根據(jù)探針的化學(xué)結(jié)構(gòu)，慢響應(yīng)探針可分為碳鏈花青類 （Carbocyanine）探和羅丹明類（rhodamines）探針和oxonol類探針。
羰花青 (Carbocyanine)
DiI、DiS 和 DiO 衍生物，羰花青類 (Carbocyanine)具有短烷基尾（<7 個(gè)碳原子）的 Indo- (DiI)、thia- (DiS) 和 oxa- (DiO) 碳花青，是最早開發(fā)出來的膜電壓探針。由于碳鏈和疏水性，這類探針富集在膜表面甚至嵌入到膜當(dāng)中，對(duì)膜電壓變化的反應(yīng)程度主要取結(jié)于探針染料的濃度和探針化學(xué)結(jié)構(gòu)。碳鏈花青類探針可同時(shí)探測(cè)細(xì)胞質(zhì)膜和線粒體膜的電壓，但是往往對(duì)線粒體膜的電壓變化更靈敏。因此，如果需要探測(cè)線粒體的膜電壓，務(wù)必只使用極低的濃度（<100 nM），來降低細(xì)胞質(zhì)膜和其他細(xì)胞器膜的干擾。
DiOC6(3) 和 DiOC5(3) 是用于膜電位測(cè)量的最廣泛使用的羰花青染料。
| 光色 | 探針名稱 | 同義名稱 | 激發(fā)波長(zhǎng)/發(fā)射波長(zhǎng)(nm) | 產(chǎn)品貨號(hào) |
|---|---|---|---|---|
| DiOC2(3) | MitoProbe DiOC2(3) | 482/497 | ||
| DiOC5(3) | 482/504 | HCT012267 | ||
| DiOC6(3) | 482/504 | |||
| DiSC3(5) | 651/675 | |||
| DiIC1(5) | MitoProbe DiIC1(5) | 640/657 |
羅丹明 123、TMRM 和 TMRE
羅丹明 123 被廣泛用作線粒體的結(jié)構(gòu)標(biāo)記物和線粒體活性的指示物。通過將細(xì)胞外 K+ 濃度設(shè)置為接近細(xì)胞內(nèi)值 (~137 mM) 來獲得線粒體的高選擇性、電位依賴性染色，從而使質(zhì)膜去極化。
TMRM 和 TMRE ，四甲基羅丹明的甲酯和乙酯與羅丹明 123 密切相關(guān)。它們主要是線粒體膜電位傳感器。這些陽(yáng)離子染料在線粒體中的積累會(huì)導(dǎo)致熒光減弱，因?yàn)樽源慊稹?TMRM 和 TMRE 比羅丹明 123 更快地穿過質(zhì)膜，并且它們的強(qiáng)熒光允許使用低濃度的探針，從而避免聚集。因?yàn)樗鼈兊臒晒鈱?duì)環(huán)境相對(duì)不敏感，TMRM 和 TMRE 的空間分辨熒光呈現(xiàn)出它們跨膜分布的無偏分布，可以通過 Nernst 方程與質(zhì)膜電位直接相關(guān)。影響活細(xì)胞中線粒體膜電位的藥物的通量篩選測(cè)定。
Oxonols
Oxonol V and Oxonol VI
通過從細(xì)胞外溶液中的能斯特平衡依賴性攝取而積聚在去極化細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。它們?cè)谒湍ぶg的電壓依賴性分配通常通過吸收而不是熒光來測(cè)量。
此外，oxonol VI 比 oxonol V 對(duì)電位變化的反應(yīng)更快，因此被認(rèn)為是測(cè)量快速電位變化的更好探針。
